跳到主要内容
科学内幕:稀有重组的分离变得既便宜又容易

你正在听的是 健康图书馆:

科学内幕:稀有重组的分离变得既便宜又容易

2014年7月13日

利用借鉴于种群生物学的原理. 卢卡·布鲁内利, 犹他大学儿科学副教授, 已经开发出一种快速和廉价的一步分离稀有重组的方法,而不使用可选择的标记. 这项研究于7月13日在线发表在《大发体育官网》杂志上. Brunelli描述了这种方法, 它的优点, 以及它的广泛适用性, 从创造动物模型到生物燃料.

事件记录

面试官: 一种新的实用方法,将提高基因工程实验室的生产力, 接下来是《大发娱乐》.

女士: 检查最新的研究,告诉你最新的突破, 《大发娱乐》在范围频道播出.

面试官: 利用借鉴于种群生物学的原理. 卢卡·布鲁内利, 犹他大学儿科学助理教授, 发展迅速, 便宜的, 分离罕见DNA重组的一步法. Dr. Brunelli,是什么促使你想出这个方法的?

Dr. 卢卡·布鲁内利: 大发娱乐对这些技术的兴趣实际上源于大发娱乐对人类遗传学和小鼠遗传学的研究,以及大发娱乐试图用小鼠来阐明人类疾病的关键机制的兴趣.

面试官: 这解决了基因工程的中间步骤.

Dr. 卢卡·布鲁内利: 是的. 大发娱乐已经描述了这个技术,大发娱乐称之为F.P.E.,创始人原则驱动的充实,在E. 这种技术通常被称为重组或重组介导的基因工程, 哪个是中间步骤, 例如, 在许多其他的事情中,生产生产转基因小鼠所需的靶向载体.

面试官: 你试图解决的一些问题是什么?

Dr. 卢卡·布鲁内利: 如果一个人想到基因组合,一般的想法是这些事件是罕见的. 关键的问题是一个普遍的概念,那就是不可能从10万个事件中分离出一个事件,除非你把一个标记与那个事件联系起来,因为它是多么罕见.
在现实中, 大发娱乐通过运用群体遗传学的原理发现了这一点, 特别是奠基人原则, 你能够非常有效地, 迅速, 便宜, 不使用标记就能简单地分离出这些罕见的变异. 群体遗传学和创始原则告诉大发娱乐的是,当你建立创始种群时, 也就是说人口非常少, 这些等位基因中的一些, 一些存在于原始种群中的遗传背景, 要么被消灭,要么被浓缩, 是固定的吗.
只要你有筛选技术,在大发娱乐的例子中是P.C.R., 能够检测您的事件是否存在于液体培养中, 当您将该培养区的大小减小到, 假设, 5000个细胞,在一些液体培养中你仍然会有一个重组, 但实际上你已经为你的重组做了准备. So, 经过两到三个富集循环,就像我刚才描述的那样,你可以分离出你的变体, 把它调到1 / 20的频率, 1 in 50, 这样你就可以很容易地把你的液体培养物放在琼脂板上,很容易地分离克隆.

面试官: 然后挑一个单独的.

Dr. 卢卡·布鲁内利: 是啊,只是挑几个.

面试官: 基本上, 你要用原来的池子,里面有重组的, 然后你把它稀释了.

Dr. 卢卡·布鲁内利: 需要多少天才能分离出你的罕见变体P是多少.C.R.你想要做什么取决于你的偏好. 在大发娱乐的手稿中,大发娱乐实际上包含了一个数学模型和一个网络计算器,允许研究人员输入他们想要的努力水平, 如果你愿意, 还有他们想要隔离的日子, 并且能够重新选择首选条件. 计算器会告诉他们应该怎样充实, 什么样的稀释?, 在这种情况下使用.

面试官: 正确的. 它快多少?

Dr. 卢卡·布鲁内利: 要生成无缝的内容,您需要同时引入选择标记和反选择标记, 所以至少要十天. 用大发娱乐的方法,最多只需要两到五天.

面试官: 哦哇. 我想会更便宜.

Dr. 卢卡·布鲁内利: 也更便宜,是的,因为你节省了试剂,抗生素,很多...

面试官: 我被这个非常简单的技巧所震撼.

Dr. 卢卡·布鲁内利: 确实如此,令人惊讶的是,这在以前从未被描述过.

面试官: 完全.

Dr. 卢卡·布鲁内利: 我必须说,一旦大发娱乐开发了这个方法大发娱乐想要包含完整的数学模型, 大发娱乐找了一位数学家来帮大发娱乐解决这个问题. 数学家的第一个评论是, 这很简单, 为什么之前没有人想到这个.

面试官: 是的.

Dr. 卢卡·布鲁内利: 对于数学家来说,这是非常容易理解的如果你把细胞的数量减少到一个数字以下,这个数字打破了罕见变异和更常见变异的对称性,很明显你可以丰富这些变异. 采访者:与锌指或薯片等其他筛选方法相比,这种方法有什么优势?

Dr. 卢卡·布鲁内利: 对于锌指和脆片,人们使用了一种不同的方法,即在DNA中制造双链断裂,这样DNA就能以更高的频率有效地进行这些变化. 但是双链断裂, 这很容易理解, 还创建了, 如果你愿意, 这样就有机会产生人们所说的脱靶效应 . . .

面试官: 我看到.

Dr. 卢卡·布鲁内利: . . . 在你不希望发生变化的DNA区域进行改变和修改.

面试官: 这种方法的应用是什么?

Dr. 卢卡·布鲁内利: 其中一个直接的含义是问大发娱乐在E中所做的是否. 大肠杆菌也可以在小鼠胚胎干细胞中复制.
大发娱乐看到的其他令人兴奋的应用是重组管道,以研究基因功能, 大规模的修改, 例如, 生产生物燃料, 因此,细菌获得了某些特性,使它们能够在某些功能上表现得更好,比如生产生物燃料或清洁水,或者任何你能想到的东西.
虽然这不是医学领域, 大发娱乐当然对其中一些应用很感兴趣, 大发娱乐正在考虑与在这些领域工作的一些研究人员合作.

女士: 有趣,内容丰富,而且都是为了更好的健康. 大发娱乐是Scope健康科学广播.